Факторы, влияющие на результаты анализов. Цель культивирования микроорганизмов и значимость ее для диагностики

Бактериологический посев (бакпосев) – это микробиологическое лабораторное исследование биологического материала человека путем его посева на определенные питательные среды при определенном температурном режиме с целью выявления наличия в нем любого количества патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и дальнейшего решения задач специфического лечения.

При выделении определенных микроорганизмов проводится второй немаловажный анализ – антибиотикограмма – определение чувствительности обнаруженных патогенов к антибактериальным препаратам и бактериофагам.

Преимуществами бактериологического посева являются:

Высокая специфичность метода (то есть перекрестных ложных реакций не наблюдается).
Возможность исследовать абсолютно любую биологическую жидкость человека.
Лечебная цель – определение чувствительности выявленного микроба к тому или иному лечебному средству (антибиотикограмма), что позволяет с достаточно высокой точностью проводить лечебные назначения.

Недостатки бактериологического посева:

Длительность получения результата.
Высокие требования к забору материала.
Определенные требования к квалификации персонала бактериологических лабораторий.

Показания для проведения бактериологического исследования

Применение микробиологического метода исследования достаточно широко распространено в медицинской практике, в частности, в инфекционных болезнях, гинекологии, урологии, хирургии, отоларингологии, онкологии и других. Безусловным показанием для необходимости проведения бакпосева являются любое воспалительное заболевание органов и систем организма человека, подозрение на септический процесс.

Материал для бакпосева

Для исследования забираются следующие биологические среды организма человека: носоглоточная слизь, слизь из зева, секрет бронхиального дерева (мокрота), испражнения (кал), слизь уретры, цервикального канала, секрет простаты, моча, кровь, спинномозговая жидкость, грудное молоко, желчь, содержимое кист, воспалительных очагов, раневое отделяемое.

Какие микроорганизмы можно выявить при бакпосеве

В слизи носа и зева можно обнаружить гемолитические стрептококки (Streptococcuc pyogenes, Streptococcuc agalactiae), пневмококки (Streptococcuc pneumoniae), золотистый стафилококк (Staphylococcus auereus), коринобактерии дифтерии (Corynebacterium diphtheriae), гемофильную палочку (Haemophilus influenzae типа b), менингококк (Neisseria meningitidis), листерии (Listeria).

В испражнениях пытаются выявить кишечную группу бактерий – салмонеллы и шигеллы (Salmonella spp., Shigella spp.) иерсинии (Iersiniae spp.), тифо-паратифозную группу бактерий (Salmonella typhi, Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B), условно - патогенные возбудители кишечных инфекций, анаэробные микробы, возбудителей пищевых токсикоинфекций, а также обследовать кал на дисбактериоз кишечника.

В содержимом ран, биопунктате, гнойном отделяемом можно выявить псевдомонады или синегнойную палочку (Pseudomonas aeruginosa).

Слизь урогенитального тракта обследуют на предмет наличия в ней возбудителей инфекций, передающихся половым путем – гонококка, трихомонады, грибов (Neisseria gonorrhoeae ,Trichomonas vaginalis, грибы рода Candida), уреаплазму (Ureaplasma urealyticum), микоплазму (Mycoplasma hominis), листерии (Listeria), также можно исследовать мазок на бактериальную флору.

Кровь можно посеять (обследовать) на стерильность.

Такие материалы, как грудное молоко, моча, секрет простаты, соскоб, мазок, раневое содержимое, суставная жидкость, желчь исследуют на общую обсемененность (бактериальную флору).

Что представляет собой бактериологический посев?

Материал для исследования в бактериологической лаборатории помещают (делают посев) на специальные питательные среды. В зависимости от желаемого поиска того или иного возбудителя или группы возбудителей посев производится на разные среды. Например, это может быть избирательная или элективная питательная среда (для роста какого-то одного возбудителя, рост других микробов при этом угнетается), примером которых может быть свернутая лошадиная сыворотка для выявления возбудителей дифтерии или среда с селенитом или с солями желчных кислот для обнаружения кишечных возбудителей.

Другим примером могут быть дифференциально-диагностические среды (среда Гисса), которые используются для расшифровки бактериальных культур. При необходимости с жидких питательных сред делают пересев на твердые среды с целью большей идентификации колоний.

Затем питательные среды помещают в термостат (специальный прибор), в котором создаются благоприятные условия (температура, влажность и др.) для роста и размножения возбудителей, в термостате среды находятся определенное время.

Далее проводят контрольный осмотр выросших колоний микроорганизмов, которые называют «культурой микроорганизмов». При необходимости проводят микроскопию материала колоний с предварительной окраской специальными красителями.

Что оценивается при контрольном осмотре? Это форма, цвет, плотность колоний, после дополнительного исследования – способность разлагать некоторые неорганические и органические соединения.

Далее проводят подсчет возбудителей. При микробиологической исследовании учитывается такое понятие, как колониеобразующая единица (КОЕ) - одна микробная клетка, способная образовать колонию, или видимая колония микробов. По КОЕ возможно определить концентрацию или количество микроорганизмов в исследуемом образце. Подсчет КОЕ проводится разными методами: подсчетом колоний под микроскопом, методом серийных разведений, секторным методом.

Правила забора биологического материала для бактериологического посева

Качество проводимого бактериологического посева во многом зависит от правильности забора материала для исследования. Нужно помнить простое правило: стерильная посуда и стерильные инструменты! Несоблюдение этих требований приведет к контаминации (внешней обсемененности материала представителями кожи и слизистых, окружающей среды, не имеющих клинического значения), что автоматически сделает исследование бессмысленным. Для забора материала используют стерильную посуду, которая выдается в самой бактериологической лаборатории на руки пациенту при амбулаторном обследовании, для забора испражнений, мочи. Из различных очагов воспаления забор проводится только стерильными инструментами (шпатели, петли, ложки) специально обученным медицинским работником (в поликлинике обычно это медсестра инфекционного или смотрового кабинетов).

Кровь и мочу собирают в сухие пробирки, остальные материалы в посуду с транспортной питательной средой.

Другое правило: забор материала до начала антибиотикотерапии! На фоне приема антибиотиков результат будет существенно искажен. Если принимали такие препараты, то прекратить их прием за 10 дней до исследования и сообщить врачу о факте приема любых антибактериальных препаратов.

Должна быть обеспечена быстрая доставка в лабораторию! Микроорганизмы могут погибнуть при высыхании, изменении кислотности. Например, кал должен быть доставлен в теплом виде .

При заборе мочи: после утренних гигиенических процедур забирается средняя порция утренней мочи в количестве 10-15 мл в стерильную посуду. Доставить в лабораторию в течение 2х часов.

При заборе мазка из зева и носа: нельзя утром чистить зубы, полоскать рот и нос дезинфицирующими растворами, пить и есть.

Забор испражнений должен производиться утром стерильной лопаточкой в стерильную посуду в объеме 15-30 гр. Недопустимо попадание в пробу мочи. Доставка в течение 5 часов. Не допускается замораживание или ночное хранение. Собирать кал без применения клизм и слабительных.

Кровь для бакпосева берется до начала антибиотикотерапии на фоне подъема температуры в стерильную пробирку в количестве не менее 5 мл (детям), не менее 15 мл (взрослым).

Мокрота собирается утром натощак в стерильный контейнер во время приступа кашля со слизью. Перед забором почистить зубы и прополоскать рот кипяченой водой. Доставить в лабораторию в течение 1 часа.

Грудное молоко собирается после гигиенической процедуры. Околососковая область обрабатывается тампоном, смоченным 70% этиловым спиртом. Первые 15 мл сцеженного молока не используются. Затем 5 мл сцеживается в стерильный контейнер. Доставить в течение 2х часов.

Отделяемое половых органов: у женщин забор проводится не ранее, чем через 14 дней после менструации, не ранее чем через 1 месяц после отмены антибиотиков, желательно в течение 2х часов не мочиться; у мужчин – не рекомендуется мочиться в течение 5-6 часов до взятия пробы.

Сроки готовности бактериологического посева

При исследовании слизи из носоглотки результат будет готов через 5-7 дней, исследование испражнений займет около 4-7 дней. При обследовании соскоба урогенитального тракта длительность исследования займет 7 дней. Посев на общую флору длится 4-7 дней. Больше всего по длительности готовится кровь на стерильность – 10 дней. Однако самый ранний предварительный результат могут дать через 3 дня.

Результат бактериологического исследования

Результатом бакпосева является как качественная оценка (сам факт наличия возбудителя в исследуемом образце), так и количественная оценка (концентрация возбудителя в материале).

Расшифровка количественного результата проводится самым простым способом. Выделяют 4 степени роста (обсемененности) микроорганизмов в исследуемом материале. Для 1 степени роста характерен скудный рост только на жидкой среде, на твердой – роста нет; для 2 степени – рост на плотной среде до 10 колоний одного вида; для 3 степени – от 10 до 100 колоний; для 4 степени – более 100 колоний.

Это важно для условно-патогенной флоры, при выявлении которой 1 и 2 степень не считают причиной болезни, это просто свидетельствует о загрязненности материала для исследования, 3-4 степени указывают на этиологию (причину) заболевания. Если выделена патогенная флора, то учитываются все без исключения выделенные колонии, то есть все 4 степени.

Результат подсчета колоний в КОЕ/мл расшифровывается следующим образом: 103/мл означает обнаружение 1 колонии; 104/мл – от 1 до 5 колоний; 105/мл – рост 5-15 колоний; 106/мл – более 15.
Количественный результат важен не только для определения степени обсемененности, но и контроля правильности проводимого лечения.

Определение чувствительности выделенного микроорганизма к тому или иному антибактериальному препарату является важной составляющей бактериологического исследования. Набор препаратов, к которому чувствителен или резистентен возбудитель, и является антибиотикограммой .

Чувствительность возбудителя – это восприимчивость к лекарственному препарату, то есть антибиотик подействует на рост и размножение микроба. Резистентность – устойчивость возбудителя к тому или иному препарату, то есть антибактериальный препарат не подействует.

Антибиотикограмма выдается в определенных единицах измерения – минимальной ингибирующей концентрации (МИК).

Врач инфекционист Быкова Н.И.

Бактериологические исследования – одни из популярнейших способов проверки разнообразных биологических жидкостей. Если подразумевается посев крови, то речь идет об анализе, помогающем определить бактериальные инфекции в человеческом организме. Бак посев требуется тогда, когда по анализу крови обычного порядка невозможно определить присутствие бактериемии. Бак посев предполагает забор материала и дальнейшее помещение в питательную среду, в которой присутствуют компоненты, позволяющие бактериям очень быстро размножаться.

Бактериологическое исследование крови предполагает предварительное выращивание культур в питательной среде. Поэтому врачи называют такие анализы культуральные исследования. Когда по прошествии нескольких дней бактерии начинают активно расти, получившуюся пробу отправляют на микроскопическое исследование. После того как культуры выросли достаточно, бактериурию определить труда уже не составляет. Однако это еще не все анализы. В таком случае дается только предварительная оценка. Чтобы идентифицировать бактерии более точно, выполняется следующий этап. Это бак посев образцов жидкой культуры в плотную среду в чашке Петри. Такое исследование помогает определить растущие бактериальные колонии. С их образцами уже можно проводить химические тесты, которые позволят более точно определить окончательный вид микроорганизма.

Все эти этапы являются подготовительными для проверки видов бактерий на чувствительность к разного рода антибиотикам. Это требуется для поиска наиболее подходящего для борьбы с инфекцией лекарства.

При выполнении бактериологического анализа крови можно обнаружить:

• стафилококков;
• стрептококков;
• энтеробактерии;
• грибки дрожжей.

Анализы крови при бактериальной инфекции в обязательном порядке проводятся пациентам со сниженным иммунитетом. К примеру, у лиц, обладающих ВИЧ, нередко обнаруживаются бактерии туберкулеза. Такое обследование помогает исключить получение неправильных результатов.

При заболеваниях инфекционной направленности у бактерий и микроорганизмов есть возможность проникнуть в кровяной ток, попасть в другие организменные системы, которые расположены неподалеку от самого очага. Если расшифровка крови на посев демонстрирует положительный результат, значит, инфекция зашла уже далеко. Это может сопровождаться повышением температуры, повышением лейкоцитов, перебоями в сердечной работе.

Особенности анализа

Бактериологический метод исследования, как и любая другая проверка, имеет свои плюсы и минусы. Среди плюсов выделяется высокая специфичность метода. Это позволяет избежать перекрестных ложных реакций. Для исследования подойдет любая биологическая жидкость. Может выполняться посев мазка, анализ мочи, крови и т.д. Лечебной целью является определение чувствительности выявленного микроба к тому или иному средству лечебной направленности. Это позволяет быстро уничтожить микроорганизмы, не тратя время на напрасное лечение.

Безусловно, не обходится и без минусов. Среди них можно отметить то, что бакпосев требует времени на выполнение. Обычно исследуемый материл находится в лаборатории не менее недели. К забору материала предъявляются серьезные требования, важно соблюсти каждое правило забора материала для бактериологического исследований. Кроме этого, персонал лаборатории должен иметь специальную квалификацию.

Обычно результаты бактериологического исследования получаются по образцам любых биологических жидкостей человека: от слизи с носоглотки, до спинномозговой жидкости. Посев крови, как и любой другой жидкости особой подготовки к анализу не предполагает. За два-три дня рекомендуется отказаться от жирного, жареного, не принимать алкоголь. Если сдаваться будет кровь, то минимум за 12 часов нужно совершить последний прием пищи. Такая особенность сдачи именуется строго натощак. За несколько часов до сдачи запрещается курить.

Кровь на посев, когда речь идет о стерильности, берется несколько раз в определенный временной промежуток. Связано это с тем, что не всегда можно добиться заражения питательной среды по одной пробе, поэтому результативным однократный забор не считается. Говорить о том, что провокатором той или иной инфекции стал определенный микроорганизм можно только после того, как будет проведено серийное исследование, как минимум, два раза. В результате неоднократного исследования должны выявляться предполагаемые бактерии. Можно выполнить одновременную проверку не только крови, но и других биологических жидкостей.

Забирать кровь нужно при максимально высокой температуре. При этом предварительное антибиотическое лечение может смазать результаты. В крайнем случае, должно пройти не менее суток с последнего антибиотического приема. Забор крови выполняется в утренние часы.

После забора выполняется посев в питательную среду, которая благоприятна для роста бактерий. Выдерживаются такие образцы при температуре 37-38 градусов в течение нескольких суток.

На сегодняшний день выполняется два вида посева. Речь идет о посеве, позволяющем определить чувствительность к основному антибиотическому спектру и о посеве с выявлением чувствительности к широкому спектру медикаментов. Обычно на получение первых результатов требуется не менее трех суток. Порой исследование растягивается до двух недель.

Вирусная инфекция

Когда в организм попадает вирус, диагностировать наличие или отсутствие можно с помощью общего анализа крови. Обычно определить присутствие инфекции может без проблем даже сам пациент, получив на руки результаты анализов. Однако это не значит, что нужно исключать консультацию со специалистом.

Чтобы определить, что именно стало причиной инфекции вирус или бактерии, нужно внимательно ознакомиться с полученными данными. Дело в том, что структурный кровяной состав меняется по-разному, в зависимости от того, причиной заражения стал вирус или бактерии.

Если причиной плохого самочувствия стал вирус, то лейкоциты будут в норме или даже чуть ниже, в самых редких случаях наблюдается некоторое увеличение. Лимфоциты представлены выше нормы, как и моноциты. На нейтрофилы вирус действует угнетающим образом, поэтому количество их снижается. Показатель СОЭ обычно остается в норме или повышается совсем незначительно.

Даже если все описанное совпадает с вашим анализом, важно учесть и симптоматику, которая у вас проявилась. Для вирусной инфекции характерен меньший инкубационный период. Обычно он не составляет более пяти дней. При этом самостоятельная постановка диагноза должна быть исключена, поскольку порой проявление бактерий происходит на фоне развития вируса, а с определением такой этиологии не будет проблемы только у специалиста.

Разные образцы

При сборе мочи на бактериологическое исследование, предполагается сбор утренней мочи, ее средней порции. Предварительно выполняется туалет наружных половых органов. Забор осуществляется в стерильную посуду, вмещающую 10-15 мл. Доставить анализ нужно в лабораторию в течение не более чем двух часов.

Если вам предстоит исследование мазка из зева и носа, то утром запрещено чистить зубы, полоскать рот и нос с использованием дезинфицирующих растворов. Запрещено употреблять пищу и воду. Если требуется выполнить бакпосев кала, то забор испражнений осуществляется из утреннего стула с помощью стерильной лопаточки в стерильную посуду, объем анализа должен составлять 15-30 грамм. Важно чтобы в пробу не попала моча.

Доставить анализ нужно в течение пяти часов. Хранить анализ ночью или замораживать запрещается. Сбор кала с помощью клизмы и слабительного тоже должен быть исключен.

Если исследовать нужно мокроту, то сбор выполняется утром натощак в стерильный контейнер во время кашельного приступа вместе со слизью. Перед сбором допустимо почистить зубы, однако для полоскания должна использоваться только кипяченая вода. В лабораторию анализ доставляется в течение часа.

Сбор грудного молока выполняется после предварительных гигиенических процедур. Область около сосков должна быть обработана тампоном, который смачивается 70ти процентным этиловым спиртом. Первые 15 мл использовать для сдачи нельзя. Из средней порции сцеживается 5 мл. Доставка анализа должна выполняться в течение двух часов.

Если выполняется анализ отделяемого с половых органов, то для женщин действует запрет на сдачу в период менструации, должна пройти хотя бы неделя после нее. Если ранее проводился антибиотический курс, то по завершении должен пройти месяц. Предварительно выполняется туалет наружных половых органов. Желательно не мочиться в течение двух часов. Мужчинам рекомендуется растянуть время отсутствия похода в туалет до пяти часов.

При соответствии полученных результатов по тестированию выделенной культуры с вышеуказанными данными полученный бактериальный штамм определяют как бактериальную культуру вида Yersinia enterocolitica.

В случае, если изучаемая бактериальная культура не типируется как бактерии вида Yersinia enterocolitica, возможен вариант повторного использования бактериальной суспензии со средой накопления, хранящейся в холодильнике при +4°С.

Оптимальным решением является постановка на исследование не одной пробы исследуемого образца, а целой серии проб.

Общие сроки бактериологического исследования материала - в пределах 7 суток.

Идентификация вида осуществляется биохимическими и серологическими методами.

Для проведения ускоренной диагностики заболевания можно использовать чумной бактериофаг. Бактериофаг Y. pestis выделяют из различных источников, включая ткани больного человека и животных, а также блох. Многие авторы связывают естественное быстрое угасание заболевания в очаге с наличием бактериофага. Его высокая специфичность и вирулентность для чумной палочки позволяют применять его для идентификации чумы внесением в исследуемый материал перед посевом либо по увеличению титра бактериофага в среде.

Для быстрого обнаружения также применяют AT, меченные флюоресцинами (позволяют обнаружить Y. pestis в различных объектах в течение первых 2 ч исследования), реакцию нейтрализации AT, реакцию преципитации в стандартных агаровых пластинках и метод ускоренного роста Y. pestis на средах обогащения.

Также разработаны методы, ускоряющие биологическую пробу, например, введение зараженным животным глюкокортикоидов или куриного желтка, что позволяет уско­рить диагностику чумы в случаях снижения вирулентности или при применении малой заражающей дозы.

Основные биохимические свойства, дифференцирующие Y.pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, представлены в таблицах 15 и 16. Дополнительными признаками могут служить результаты реакции Фoгеса-Проскауэра: всегда отрицательные у Y. pseudotuberculosis и положительные при 22-28°С у Y. enterocolitica. В последнее вре­мя для выделения Y.enterocolitica из фекалий предложена селективная среда, содержа­щая цефсулодин, иргазан и новобиоцин (CIN-агар).

Питательные среды для культивирования иерсиний Фосфатно-буферный раствор (фбр)

Раствор А: KH 2 PO 4 – 9,08 г в 1,0 л дистиллированной воды; раствор Б: Na 2 HPO 4  2H 2 O – 11,87 г в 1 л дистиллированной воды (pH 7,6-7,8). 150 мл раствора А соединить с 850 мл раствора Б. Разлить по 5 мл в пробирки, стерилизовать при 1 атм. в течение 1 часа.

Буферно-казеиново-дрожжевая среда (бкд)

Гидролизат казеина средней степени расщепления – 2,0 мл (Дагестанский НИИ питательных сред); экстракт пекарских дрожжей – 5,0 мл; фосфатно-буферный раствор (pH 7,6-7,8) – до общего объема 1 л. Экстракт пекарских дрожжей: к 500 г дрожжей, предварительно размельченных до гомогенной массы в фарфоровой ступке в малом объеме дистиллированной воды добавить до 1 л дистиллята. Взвесь слить в колбу и кипятить в течение 60 минут на медленном огне при помешивании. Взвесь охладить при 5°С в течение 16-18 часов. Затем надосадочную жидкость слить и профильтровать через широкопористый бумажный фильтр. Приготовленный дрожжевой экстракт разлить во флаконы, простерилизовать под давлением 0,5 атм. 30 минут; хранить при температуре 5-8°С в течение 12 месяцев.

К 0,5 л фосфатно-буферного раствора добавить 2,0 г гидролизата казеина (предворительно подготовленного согласно указаниям на этикетке) и 5,0 мл экстракта дрожжей. Смешать встряхиванием, добавить фосфатно-буферный раствор до общего объема 1 л и проверить pH готовой среды (должен быть 7,6-7,8). Далее смесь разлить в пробирки по 5,0 мл и автоклавировать под давлением 0,5 атм. в течение 20 минут. Среду можно использовать в течение 7-10 суток при хранении в условиях холодильника.

Диагностика инфекционных заболеваний необходима для последующего проведения адекватной этиотропной терапии, направленной на уничтожение возбудителя патологического процесса. Выявление и идентификация патогенных микроорганизмов проводится при помощи различных методик лабораторной диагностики, одним из которых является бактериологическое исследование.

Бактериология как наука получила развитие в XIX веке благодаря внедрению бактериологических методик исследования.

Принцип и суть методики

Основной целью бактериологического исследования является выявление и последующая идентификация патогенного (болезнетворного) микроорганизма в исследуемом материале. Для этого проводится посев на специальные питательные среды (мясо-пептонный бульон, плотная среда агар), на котором при наличии возбудителя в материале через некоторое время вырастают колонии микроорганизмов. Их идентифицируют по микроскопическим (размер клеток, их форма, определенный цвет при окрашивании по Граму), биохимическим (способность расщеплять некоторые углеводы или
белки) и антигенным (взаимодействие с антителами к основным классам возбудителя) свойствам. В целом на проведение данной методики диагностики требуется от 48 до 72 часов, что достаточно долго (особенно при необходимости быстрого начала этиотропной терапии инфекционной патологии). Тем не менее данный вид лабораторной диагностики не теряет своей актуальности на сегодняшний день, так как является достоверным для большого количества инфекционных заболеваний.

Очень часто во время бактериологического исследования дополнительно проводится определение чувствительности выделенного патогенного микроорганизма к основным группам современных антибиотиков. Это дает возможность в последующем подобрать наиболее эффективную этиотропную терапию.

Когда проводится бактериологическая диагностика

Показанием к проведению бактериального исследования служит диагностика различных инфекционных заболеваний, к которым относятся:

Также данная методика может проводится для определения возбудителя гнойных процессов различной локализации. В первую очередь это необходимо для определения чувствительности выявленных микроорганизмов к антибиотикам, так как при развитии гнойного процесса возбудители часто являются устойчивыми к большинству антибиотиков.

Диагностика дисбактериоза при помощи бактериологического исследования дает возможность определить вид условно-патогенных микроорганизмов, а также их количество, на основании чего делается заключение о выраженности нарушения нормальной микрофлоры.

Материалом при бактериологическом исследовании служит моча, кровь, мазки из полости носа, уретры, влагалища, прямой кишки, кал, сперма у мужчин, мокрота. Выбор материала зависит от показаний к проведению данного метода лабораторной диагностики и локализации патологического процесса.

Расшифровка результатов

В большинстве случаев результат исследования основывается на 2-х показателях - факт наличия выявляемого
микроорганизма (положительный или отрицательный результат), а также количество бактериальных клеток на единицу объема исследуемого материала (данный показатель имеет место только при положительном результате). Численность бактерий выражается в количестве колониеобразующих единиц (КОЕ). Чем выше данный показатель, тем большее количество бактерий в исследуемом материале. Также результат может включать показатели чувствительности выявленного микроорганизма к антибиотикам. Он обычно состоит из списка основных классов антибактериальных средств (

Исследование, применяемое для выявления патогенных бактерий в материале от больных животных или их трупов, обнаружение микробов в объектах внешней среды, кормах, мясе и т. д. Характер и методика взятия проб, способ пересылки материала при различных инфекционных болезнях неодинаковы, но существуют общие положения, которые необходимо учитывать независимо от объекта исследования и свойств материала. Исследуемый материал по возможности собирают в асептических условиях в стерильную посуду и доставляют в ближайшее время с сопроводительным документом в лабораторию (в нём указаны дата взятия, характер и источник материала, основные клинические признаки болезни и патологоанатомические изменения, цель исследования). Б. и. включает 3 основных метода: микроскопию (бактериоскопию) мазков из патологического или др. исследуемого материала; выделение чистой культуры бактерий с последующим изучением морфологических, культурально-биохимических, антигенных и патогенных свойств бактерий.

Бактериологическое исследование начинают с микроскопии, что позволяет обнаружить в материале микробов, изучить их морфологию (форму, размер, строение). При микроскопии патологического материала готовят мазки-отпечатки из органов, тканей или тонкие мазки из другого исследуемого материала, высушивают их на воздухе, фиксируют (чаще фламбированием) и окрашивают тем или иным методом в зависимости от направленности исследования (см. Окраска микроорганизмов). Для обнаружения некоторых бактерий (например, возбудителя туберкулёза) патологический материал предварительно обрабатывают одним из методов обогащения, чтобы повысить в нём концентрацию бактерий и избавиться от посторонних микробов. Для ускоренного обнаружения бактерий применяют люминесцентную микроскопию. Для изучения подвижности бактерий, обусловленной наличием жгутиков, используют микроскопию молодой (12-24 ч) живой культуры с помощью препаратов висячей капли или раздавленной капли. Подвижность бактерий может быть установлена также на основе особенностей роста культуры в полужидком МПА. Выделение культуры бактерий проводят путём посева материала на среды питательные. Чтобы облегчить и ускорить выделение бактерий, используют дифференциально-диагностические и элективные питательные среды (плотные и жидкие), на которых определённые виды бактерий дают характерный для них рост (при этом задерживается рост посторонних микробов). Посев на плотные питательные среды в бактериологических чашках проводят путём растирания шпателем нескольких капель материала по поверхности среды. При исследовании паренхиматозных органов убитых или павших животных обжигают или фламбируют кусочек органа, затем надрезают его стерильными ножницами и с помощью пинцета проводят надрезанной поверхностью по питательной среде в чашке. В жидкую среду посев материала делают пастеровской пипеткой. Чтобы получить рост изолированных колоний микробов на плотной среде и отделить исследуемые бактерии от сопутствующих микроорганизмов, проводят дробный посев по методу Дригальского. Засеянные чашки и пробирки инкубируют в термостате при оптимальной для роста каждого вида бактерий температуре (чаще 37°C) в течение 1-2 сут, в некоторых случаях (туберкулёзные бактерии) - до 3-4 нед. Наиболее длительный и сложный этап Б. и. - родовая и видовая идентификация выделенных культур. Изучают только чистые культуры, полученные после пересева из одной колонии и имеющие идентичные морфологические и тинкториальные свойства (см. Идентификация микробов). Антигенные свойства культуры изучают в реакции агглютинации. Определение патогенных свойств бактерий проводят путём заражения лабораторных животных культурой или фильтратом культуры (при определении токсинообразования).

После изучения свойств бактерий сопоставляют полученные данные с признаками бактерий, имеющимися в классификационных схемах или определителях микробов (Д. Берджи, 1974; Н. А. Красильников, 1949, и др.), и проводят их родовую и видовую дифференциацию. В сомнительных случаях проводят повторное исследование материала. Результаты Б. и. записывают в регистрационный журнал или на бланке лабораторной экспертизы, в заключении которой указывают, какой микроб выделен из исследуемого материала. Диагноз на инфекционную болезнь может быть поставлен только при учёте эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных.